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    Title: Production of antiserum against the nucleocapsid protein of Tomato spotted wilt virus and investigation of its serological relationship with other tospoviruses
    Authors: 陳袖綿;王筠棋;吳佩儒;陳宗祺;Chen, Tsung-Chi;*
    Contributors: 生物科技學系
    Keywords: 番茄斑萎病毒屬;核鞘蛋白;血清學
    Date: 2014-06
    Issue Date: 2014-12-16 17:00:12 (UTC+8)
    Abstract: 番茄斑萎病毒屬 (Tospovirus) 隸屬於布尼亞病毒科 (Bunyaviridae),病毒顆粒呈球
    型具外套膜 (envelope),其內含三條單股 RNA 片段,依大小稱之為 L、M 及 S RNA,
    由薊馬類 (thrips) 昆蟲以永續性方式傳播,核鞘蛋白 (nucleocapsid protein,NP) 序列的
    同源性與血清學親緣關係,為該類病毒分類之重要依據。番茄斑點萎凋病毒 (Tomato
    spotted wilt virus,TSWV) 是 Tospovirus 屬的代表種 (type species),寄主範圍廣,且
    在全世界造成嚴重的危害,在台灣亦有危害甜椒及彩色海芋等作物的記錄。為了落
    實防檢疫工作,本研究以細菌表現系統生產 TSWV 之 NP 做為抗原,用以製備抗血
    清,命名為 RAs-TSWV-NP。經間接酵素連結免疫吸附分析法 (indirect enzyme-linked
    immunosorbent assay,indirect ELISA) 與西方墨點轉漬法 (western blotting) 分析 RAsTSWV-NP
    和 16 種 tospoviruses 之反應,可得知 RAs-TSWV-NP 除了與 TSWV 反應外,
    亦與花生輪斑病毒 (Groundnut ringspot virus,GRSV)、番茄黃化斑點病毒 (Tomato
    chlorotic spot virus,TCSV)、水仙百合壞疽條斑病毒 (Alstroemeria necrotic streak
    virus,ANSV)、菊花莖部壞疽病毒 (Chrysanthemum stem necrosis virus,CSNV)、以及
    鳳仙花壞疽斑點病毒 (Impatiens necrotic spot virus,INSV) 產生血清反應。親緣演化分
    析顯示 TSWV、GRSV、TCSV、ANSV、CSNV 及 INSV 屬於同一演化分支 (clade)。關56 植物保護學會會刊 第56卷 第2期 2014
    緒 言
    Bunyaviridae 科之病毒乃藉由
    節肢動物傳播,其下分為五個病毒
    屬 (genus),分別為 Orthobunyavirus、
    Hantavirus、Nairovirus、Phlebovirus 及
    Tospovirus,而 Tospovirus 為該病毒科中
    唯一可感染植物之一屬,可被薊馬類昆
    蟲以永續性方式傳播。此類病毒型態為
    具有脂質蛋白套膜 (lipoprotein envelope)
    之球型顆粒,直徑約在 80-110 nm 之
    間。在病毒顆粒內有三條線狀單股基因
    體 RNA 分子,依其分子量大小分別命
    名為 L RNA、M RNA 及 S RNA,此三條
    基因體 RNA 之兩端序列為互補且相互
    配對,並分別與核鞘蛋白 (nucleocapsid
    protein,NP) 緊密包裹形成一假環狀構
    造 (pseudo-circular structure)(26)。L RNA
    為負極性 (negative polarity),具有一個
    大轉譯架構 (open reading frame,ORF),
    可對應產生一個大蛋白,為病毒之複製
    酶(15)。M RNA為雙極性 (ambisense) 表現
    策略,具有兩個轉譯架構,病毒股 RNA
    對應產生一個非結構性 NSm 蛋白,為
    病毒的移動性蛋白,可在受病毒感染的
    植物及昆蟲細胞形成管狀結構(29,32);而
    病毒互補股產生一個醣蛋白的前驅物,
    經裂解後產生 Gn 及 Gc 蛋白,在病毒
    的外套膜上形成突起 (spikes) 的構造,
    且 Gn 和 Gc 蛋白對於病毒能在薊馬體內
    複製及傳播扮演關鍵的角色(27)。S RNA
    亦為雙極性,可對應產生兩種蛋白質,
    一為由病毒股 RNA 對應產生之非結構
    性 NSs 蛋白,可在感病細胞內形成絲
    狀體結構(28),其功能則與病毒的致病性
    (pathogenicity) 有關,亦為病毒抵禦植
    物基因沉寂作用 (gene silencing) 之抑制
    因子 (suppressor)(3,44);另一個由 S RNA
    互補股所對應產生的 NP,為核酸結合
    性蛋白(16),其血清學及序列親緣關係為
    tospoviruses 分類之重要依據(20)。
    依據現行之分類標準,tospovirus
    的 NP 胺基酸序列相同度 (identity) 較其
    他病毒低於 90% 者,可視為一獨立的病
    毒種 (species),按照此分類規則,現今
    已發表之 tospoviruses 共有 26 種,包括
    有 8 種正式的學名種 (official species):
    番茄斑點萎凋病毒 (Tomato spotted wilt
    virus,TSWV)(16)、鳳仙花壞疽斑點病
    毒 (Impatiens necrotic spot virus,INSV)
    (30)、花生輪斑病毒 (Groundnut ringspot
    virus,GRSV)(35)、番茄黃化斑點病毒
    (Tomato chlorotic spot virus,TCSV)
    (14)、西瓜銀斑病毒 (Watermelon silver
    mottle virus,WSMoV)(48,49)、花生頂芽
    壞疽病毒 (Peanut bud necrosis virus,
    PBNV)(39)、花生黃斑病毒 (Peanut yellow
    於 TSWV、GRSV、TCSV 和 ANSV 之間的血清學關係雖早已於先前的文獻中報導,然
    而本研究結果更進一步指出 TSWV 與 CSNV 及 INSV 之間亦可能存在著血清學親緣關
    係,此結果與親緣演化分析符合。親緣關係的釐清將有助於 Tospovirus 屬病毒的診斷
    與鑑定。
    Relation: Plant Protection Bulletin
    Appears in Collections:[生物科技學系] 期刊論文

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